基于网络药理学、分子对接和动物实验探讨大补肝汤治疗广泛性焦虑症（generalized anxiety disorder，GAD）的作用机制。通过网络药理学和分子对接获得大补肝汤治疗GAD的可能靶点和相关信号通路。建立GAD大鼠模型，随机分组后相应药物灌胃，连续干预28 d后检测各组大鼠焦虑状态，并检测大鼠海马病理改变，采用酶联免疫吸附法（ELISA）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测相关蛋白表达水平。初步筛选共得到大补肝汤中化合物65种，作用靶点403个，GAD疾病靶点7 398个，“药物-疾病”共有靶点279个，蛋白-蛋白互作（protein-protein interaction，PPI）网络关键节点为丝氨酸和苏氨酸激酶1（Akt1）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）、白细胞介素（interleukin，IL）-6、细胞肿瘤抗原p53（D-Lin-MC3-DMA分子式Tumor Protein 53，TP53）、IL-1β等；基因本体（Gene Ontology，GO）功能分析与京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）富集分析显示，PI3K-Akt信号通路是最主要途径。分子对接显示，药物核心成分与对应关键靶点均具有较好的结合活性。动物实验显示，大补肝汤可有效改善大鼠焦虑行为，增加大鼠在高架十字迷宫中开臂端运动距离及总距离、进入明箱次数及停留时间、进入旷场中央时间（%）及次数。苏木精-伊红（HE）染色、尼氏染色显示，大鼠海马神经细胞数量增加，排列紧密，细胞体损坏改善，细胞中尼氏体增加，海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β表达下降，TP53、Tumor-infiltrating immune cell磷酸化丝氨酸和苏氨酸激酶（p-Akt）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）表达上升，其机制可能与激活PI3K-Akt信号通路、抑制炎症反应有关。结果表明，大补肝汤对GAD起到很好的治疗调控作用，体现了中药复方整体作用和多靶点、多通路的特点。同时，初步探讨了大补肝汤治疗GAD可能通过激活PI3K/AkNSC 119875t信号通路，抑制炎症反应、抗细胞凋亡，从而改善GAD状态，为大补肝汤的临床应用提供实验数据支持。