类黄酮具有抗氧化、抗菌和抗炎等生物活性,可降低疾病风险,对人类健康有益,但绿叶生菜中含量却不高,因此,提高类黄酮含量是绿叶生菜获取抗氧化能力的极好来源,具有实际的应用价值。miRNA作为重要的调节因子,在调节植物类黄酮生物合成以及其他次生代谢产物方面发挥着重要作用。miR858通过调控靶标MYB蛋白,参与调控植物的次生代谢产物含量,在拟南芥、番茄等植物中已有相关报道,但目前尚无关于miR858在生菜中提高类黄酮含量的研究。本研究分析了不同叶色生菜的指标差异,预测并验证了miR858与MYB111的互作机制,在生菜愈伤组织培养体系的基础上,应用STTM技术获得了下调miR858表达的T2代生菜植株,并探究了降低miR394的表达对绿叶生菜类黄酮含量及抗氧化性能的影响。主要研究结果如下:1.本研究测定了不同叶色生菜的类黄酮含量、抗氧化指标及基因表达水平。结果显示紫叶生菜较红叶、绿叶生菜具有更高的类黄酮及更强的总抗氧化能力;三者的SOD、POD、CAT抗氧化酶活性差距明显,且紫叶生菜最高、绿叶生菜最低;紫叶生菜的DPPH与ABTS自由基清除率较高,清除效果良好;所有品种的miR858表达水平均与类黄酮含量呈负相关趋势,而靶标MYB111呈正相关趋势。2.本研究通过生物信息学预测了miR858与MYB111的靶标互作可能性,并通过构建成功的pOT2-miR858与p TF486-MYB111载体瞬时转染本氏烟草,结果显示MYB111定位于细胞核中;GFP荧光强度和q PCR结果均显示MYB111-GFP荧光/表达量较高,而pOT2-miR858+MYB111-GFP荧光/表达量较低,即证明miR858可以靶向调控MYB111的表达。3.应用STTM技术成功构建可降低miR858表达的pFGC5941-pOT2-STTM858载体,通过农杆菌介导转入绿叶生菜中,经愈伤组织培养、Kan筛选出了具有抗性的10株T0代生菜,采用PCR技术检测到2株为假阳性,假阳性率仅有20%;将阳性T0代生菜植株命名为STTM858Las并进行继代培养,获得T2代转基因生菜植株。4.测定野生型生菜WT及T2代转基因生菜STTM858Las的类黄酮含量及抗氧化指标。结果显示,STTM858Las比WT类黄酮含量高出约16.3%、总抗氧化能力高出约11.4%;抗氧化酶与苯丙氨酸解氨酶活性也显著升高,且清除DPPH与ABTS自由基的效果更好。5.使用qRT-PCR技术,检测WT及STTM858Las中miR858、MYB111以及类黄酮生物合成途径中多个关键酶基因的表达量。结果显示,STTM858Las的miRCSF biomarkers858的表达量至少降低了2.08倍,MYB111表达量至少升高了2.87倍;与野生型生菜相比,T2代转基因生菜中CHI、CHS、ANS、DFR购买Erdafitinib、PAL、F3H的相对基因表达量均有显著提升。综上所述,紫叶与红叶生菜通过其高含量的类黄酮来保证自身的抗氧化活性,因此可通过提高绿叶生菜中类黄酮含量来提升其抗氧化能力。本研究在预测并验证miR858与MYB111的靶标互作后,应用SAHA核磁STTM技术,获得了降低miR858表达的T2代转基因生菜植株。实验结果显示,转基因生菜的类黄酮含量上升,提升了其抗氧化能力。因此推测,MYB111可能促进了类黄酮生物合成途径中关键酶基因的表达,进而促进生菜类黄酮的积累,从而提升生菜的抗氧化能力。