内质网应激头颈部鳞状细胞癌细胞通过外泌体miR-26a-5p调控PTEN/AKT通路促进巨噬细胞PD-L1表达

目的 探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)细胞分泌的外泌体miRNA表达变化对巨噬细胞的影响机PD0325901 IC50制。方法 本研究已通过单位伦理委员会审查批准。通过蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)和实时荧光定量PCR实验(RT-qPCR)检测HNSCC肿瘤组织及癌旁组织ERS相关蛋白,包括蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)和葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)的表达水平;以500 U/mL干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)处理人喉鳞癌细胞系HN4细胞48 h,诱发HN4细胞产生内质网应激反应,收集HN4细胞分泌的外泌体,通过生物信息学分析鉴定外泌体的miRNA种类,预测miRNA的靶基因,将巨噬细胞转染miRNA、与收集的外泌体共培养、并敲低巨噬细胞PTEN表达,以WB和RT-qPCR检测外泌体miRNA调控的下游信号通路蛋白酪氨点击此处酸磷酸酶(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)及程序性死亡受体-1配体(programmed death receptor ligand 1,PD-L1)表达变化。结果 HNSCC肿瘤组织相比癌旁组织ERS相关蛋白表达水平升高(P<0.05);RNA测序及实验验证表明ERS的HN4细胞分泌的外泌体miR-26a-5p表达上调(P<0.05);PTEN是miR-26a-5p的靶基因,miR-26a-5p升高巨噬细胞PD-L1表达水平,并下调PTEN表达(P<0.05);巨噬细胞与ERS外泌体共培养,miR-26a-5p和PD-L1表达上升,PTEN表达下降,p-AKT表达升高(P<0.05);敲低巨噬细胞PTEN表达,PD-L1表达上升(P<0.01)。结论ERS的HNSCC细胞通过外泌Predisposición genética a la enfermedad体miR-26a-5p调控PTEN/AKT通路及PD-L1的表达。