目的:探讨克膜方干预膜性肾病大鼠ILK信号通路作用机制。方法:1.动物选择:选取体重(180±20)g的SD大鼠64只,随机分为空白组8只、造模56只。2.造模及分组:根据改良Border法(C-BSA)造模。24h尿蛋白定量≥20mg,证明模型成功。造模成功后,大鼠随机分为7组,包括模型组、克膜方(中药)高、中、低剂量组、盐酸贝那普利对照组、ILK抑制剂(OSU)+中药(中)组、ILK抑制剂(OSU)组。3.给药:空白组、模型组给予4ml/只生理盐水灌胃;中药高、中、低剂量组分别给予高中低浓度中药提取液Laduviglusib说明书4ml、3ml、2ml/只,盐酸贝那普利对照组给予盐酸贝那普利水溶液灌胃,灌胃体积为2ml/只,OSU+中药(中)组给予OSU-T315水溶液1ml/只灌胃+中药中剂量水溶液2ml/只灌胃,OSU组给予OSU-T315水溶液2ml/只灌胃,每日1次,共持续4周。4.观察指标:(1)大鼠的一般状态;(2)观察肾脏病理组织变化;(3)全自动生化分析仪检测大鼠血清中BUN、ALT、AST、Scr、TC、TG、ALB含量情况;(4)Western Blot法检测肾组织TGF-β1、Nephrin、ZO-1、desmin、MMP-9、α-SMA、Snail、ILK蛋白表达;(5)半定量RT-PCR法检测TGF-β1、Nephrin、ZO-1、desmin、MMP-9、α-SMA、Snail表达。结果:(1)实验中共出现12只大鼠死亡,造模期间死亡8只,给药期间死亡4只,其中模型组2只,盐酸贝那普利对照组1只,中药(低)组1只;造模组在第4周后出现少动抱团及不同程度的精神不振,食欲逐渐变差,生长缓慢,毛色逐渐失去光泽,背毛蓬松,反应迟缓,大鼠体重不同程度减轻,粪便稀软且有明显臭味,部分大鼠出现阴囊水肿。给药后中药组、各对照组大鼠活动情况、精神状态、食欲、生长速度、毛色以及水肿情况好转。(2)光镜下观察,空白组大鼠未见明显病理结构及形态改变。模型组大鼠肾小球的体积增大,足突排列不规整,部分足突融合、消失,基底膜显著增厚,出现空泡变性上皮下出现颗粒状的嗜复红物沉积。与模型组比较,中药组、盐酸贝那普利对照组、OSU+中药(中)组、OSU组的肾小球的体积、基底膜显著增厚程度、空泡变性、颗粒状的嗜复红物沉积程度均有所改善,其中以OSU+中药(中)组最为显著。(3)全自动生化仪自动检测各组大鼠血清中肾功能(BUN、Scr)、肝功能(ALT、AST)、血脂(TC、TG)、血浆白蛋白(ALB);肾、肝功能在各种大鼠给药前后并无明显差异。血脂:与空白组相比,模型组显著上升(P<0.05),CB-839与模型组相比,各给药组均下降,其中OSU+中药(中)组最为显著。血浆白蛋白:与空白组相比,模型组显著下降(P<0.05),与模型组相比,各给药组均明显上升,其中OSU+中药(中)组最为显著(P<0.05)。(4)Western Blot法分析克膜方对TGF-β1、Nephrin、ZO-1、desmin、MMP-9、α-SMA、Snail、ILK表达水平的影响,结果显示:与空白组相比,模型组大鼠肾脏组织中TGF-β1、MMP-9、desmin、α-SMA、Snail、ILK蛋白表达显著上升,而Nephrin、ZO-1表达显著下降(P<0.05)。与模型组相比较,中药组、OSU+中药(中)组大鼠肾脏组织中TGF-β1、MMP-9、desmin、α-SMA、Snail、ILK蛋白表达显著下降,Nephrin、ZO-1表达显著上升(P<0.05);盐酸贝那普利对照组肾脏组织TGF-β1、MMP-9、desmin、α-SMA、Snail表达显著增加(P<0.05),Nephrin、ZO-1表达显著上升(P<0.05);OSU组大鼠肾脏组织中、atypical infectiondesmin、α-SMA、ILK表达显著下降,Nephrin表达显著上升(P<0.05)。(5)qRT-PCR法分析克膜方对TGF-β1、Nephrin、ZO-1、desmin、MMP-9、α-SMA、Snail、ILK表达水平的影响,结果显示:与空白组相比,模型组Nephrin、ZO-1的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),TGF-β1、desmin、MMP-9、α-SMA、Snail的mRNA表达水平显著上升(P<0.05);与模型组相比,中药组TGF-β1、desmin、MMP-9、α-SMA、Snail的mRNA表达水平降低,而的Nephrin、ZO-1的mRNA表达水平提高,其中以中药(高)剂量组最为显著(P<0.05),盐酸贝那普利对照组、OSU+中药(中)组TGF-β1、desmin、MMP-9、α-SMA、Snail的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),Nephrin、ZO-1的mRNA表达水平显著上升(P<0.05),OSU组降低TGF-β1、desmin、MMP-9、α-SMA、Snail的mRNA转录,以desmin更为显著(P<0.05),增加的Nephrin、ZO-1的mRNA表达水平,以Nephrin更为明显(P<0.05)。结论:(1)克膜方(中)剂量+ILK抑制剂可明显改善MN肾病大鼠肾脏病理损伤情况,保护肾脏功能。(2)克膜方(中)剂量+ILK抑制剂提升MN肾病大鼠血清白蛋白含量水平,降低血脂水平。(3)克膜方(中)剂量+ILK抑制剂能够提高MN肾病大鼠肾组织中Nephrin、ZO-1蛋白的表达水平,降低desmin、MMP-9、α-SMA蛋白表达水平,降低ILK信号通路关键因子snail、ILK信号的表达,改善程度显著优于盐酸贝那普利对照对照组,我们推测克膜方可通过调控ILK信号通路,干预肾小球足细胞转分化的发生发展,实现对MN大鼠足细胞保护的重要机制之一。