目的:干燥综合征(Sj(?)gren’s synSAHA分子量drome,SS)是一种以外分泌腺CD4~+T淋巴细胞高度浸润为特征的慢性全身性自身免疫性疾病,CD4~+T细胞的过度激活在SS发病机制中起着关键作用。自噬是维持CD4~+T细胞免疫稳态和功能的重要机制之一。目前SS治疗只能改善症状,无法修复受损组织,且长期使用可能导致感染和恶性疾病等副作用。因此,目前亟需寻找安全有效的治疗策略来治疗SS。人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,h UCMSCs)可调节SS患者的免疫紊乱,促进腺体修复,但来源、安全和伦理问题限制其临床应用。h UCMSCs来源的外泌体(h UCMSC-derived exosomes,h UCMSC-Exos)可模拟h UCMSCs的免疫调节及组织修复作用,规避其局限性。本课题组前期研究已证实,h UCMSC-Exos可抑制SS患者外周血CD4~+T细胞的自噬水平,并且通过调控CD4~+T细胞自噬水平进而调节其分化。那么h UCMSC-Exos是否可以在体内调控CD4~+T细胞自噬水平,发挥其治疗作用。本研究拟就h UCMSC-Exos在非肥胖糖尿病(Non-obese diabetic,NOD)小鼠体内的作用及能否调节NOD小鼠体内CD4~+T细胞自噬水平等问题作进一步探讨,以期为临床上治疗SS提供一定的理论与实验依据。方法:(1)取新鲜脐带培养原代h UCMSCs并进行传代培养,鉴定h UCMSCs的表面抗原表型及多向分化能力,超速离心法得到h UCMSC-Exos,透射电镜鉴定其形态,纳米颗粒跟踪分析技术分析其粒径大小,蛋白印迹法鉴定其表面抗原表型。(2)选取18只8周龄自发型干燥综合征动物模型NOD雌性小鼠,随机分为3组,分别为PBS干预组、h UCMSCs干预组、h UCMSC-Exos干预组。C57BL/6小鼠作为正常对照组。(3)干预4周后,每周记录小鼠体重和唾液流率,对小鼠颌下腺组织进行HE染色,观察其病理组织学变化。(4)免疫组化检测小鼠颌下腺、脾脏LC3Ⅱ、P62、Atg5和Beclin1的表达水平。(5)免疫荧光检测小鼠颌下腺、脾脏LC3Ⅱ、P62、Atg5、Beclin1与CD4~+T细胞共定位情况。(6)免疫磁珠分选小鼠脾脏CD4~+T细胞,蛋白印迹法检测小鼠脾脏CD4~+T细胞中LC3Ⅱ、P62、Atg5及Beclin1的表达水平。结果:(1)与PBS干预组的NOD小鼠相比,h UCMSC-Exos干预组NEPZ-6438采购OD小鼠的体重增加(P<0.0001);h UCMSC-Exos干预组NOD小鼠体重较h UCMSCs干预组无明显增加。(2)与C57BL/6组小鼠相比,PBS干预组NOD小鼠唾液流率降低(P<0.001)。使用h UCMSC-Exos干预NOD小鼠后,可以增加其唾液流率(P<0.001)。(3)与C57BL/6组小鼠相比,PBS干预组NOD小鼠颌下腺淋巴细胞浸润程度明显增加,组织损伤明显。使用h UCMSC-Exos干预NOD小鼠后,可以减轻其淋巴细胞浸润程度,改善组织损伤,降低颌下腺病理评分(P<0.05)。(4)与C57BL/6组小鼠相比,PBS干预组High density bioreactorsNOD小鼠颌下腺、脾脏的LC3Ⅱ、Atg5和Beclin1的表达增加、P62的表达降低(P<0.001);使用h UCMSC-Exos干预NOD小鼠后,可以降低LC3Ⅱ、Atg5和Beclin1的表达水平、增加P62的表达水平(P<0.001)。(5)与C57BL/6组小鼠相比,PBS干预组小鼠颌下腺、脾脏CD4~+T细胞的LC3Ⅱ、Atg5和Beclin1的表达增加、P62的表达降低(P<0.001)。使用h UCMSC-Exos干预NOD小鼠后,可以降低颌下腺、脾脏CD4~+T细胞LC3Ⅱ、Atg5和Beclin1的表达水平、增加P62的表达水平(P<0.01)。(6)与C57BL/6组小鼠相比,PBS干预组的NOD小鼠脾脏CD4~+T细胞的LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平升高(P<0.001)、P62蛋白表达水平降低(P<0.001)、Atg5蛋白表达水平升高(P<0.01)、Beclin1蛋白表达水平升高(P<0.01);h UCMSCs-Exos干预后,可降低LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平(P<0.01)、升高P62蛋白表达水平(P<0.05)、降低Atg5蛋白表达水平(P<0.05)、降低Beclin1蛋白表达水平(P<0.01)。结论:(1)h UCMSC-Exos可以增加NOD小鼠的体重和唾液流率,并降低其颌下腺组织淋巴细胞浸润程度、改善组织损伤。(2)h UCMSC-Exos可以抑制NOD小鼠颌下腺、脾脏CD4~+T细胞自噬。